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iFish專業(yè)軟件,熒光原位雜交(fluorescenceinsituhybridization)簡稱FISH,是指用已知的熒光素標(biāo)記的單鏈核酸為探針,按照堿基互補(bǔ)配對的原則,與待檢測材料中未知的單鏈核酸進(jìn)行特異性結(jié)合,形成可被檢測的雜交雙鏈核酸。隨后在熒光顯微鏡下進(jìn)行定性、定量或相對定位分析。與傳統(tǒng)的放射性標(biāo)記原位雜交相比,熒光原位雜交具有快速、檢測信號強(qiáng)、雜交特性高和可以多重染色等特點(diǎn),因此在分子細(xì)胞遺傳學(xué)領(lǐng)域受到普遍關(guān)注。
iFish專業(yè)軟件的原理如下:FISH使用的探針DNA帶有熒光染料;探針DNA的序列的設(shè)計(jì)和目標(biāo)DNA序列一致;在特殊設(shè)定下,目標(biāo)DNA和探針DNA的雙鏈會被分開,隨后因互補(bǔ)配對粘合在一起(因序列一致),粘合的部分(也就是目標(biāo)DNA的位置),在特殊顯微鏡觀察下可顯示熒光,這樣就知道目標(biāo)DNA的表達(dá)是在什么位置了。
iFish專業(yè)軟件可用于轉(zhuǎn)基因的細(xì)胞學(xué)鑒定:在外源基因表達(dá)中一個重要的影響因素就是位置效應(yīng),即外源基因在受體細(xì)胞基因組中的位置不但影響轉(zhuǎn)入基因的表達(dá)也影響生物內(nèi)在基因的結(jié)構(gòu)和表達(dá)。如果原位雜交檢測顯示特異的雜交信號,則表明外源基因已經(jīng)整合到該生物的染色體上。除此之外,重組細(xì)胞系的分析和鑒定也非常重要,與基因拷貝數(shù)相反,似乎更考慮了外源基因的染色體整合。由于整合事件的隨機(jī)性質(zhì),幾個位點(diǎn)可能能夠支持轉(zhuǎn)基因的轉(zhuǎn)錄,或者表達(dá)水平受基因環(huán)境在基因座處的作用(位置效應(yīng))影響很大。熒光原位雜交(FISH)是一項(xiàng)功能強(qiáng)大的技術(shù),可用于可視化外源基因整合位點(diǎn)并提供對外源基因的情況有更好理解。憑借多年的經(jīng)驗(yàn)和深入的知識,我們可以使用熒光原位雜交(FISH)來確認(rèn)轉(zhuǎn)基因的整合并確定其染色體帶位置。
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